細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

BJ人皮膚成纖維細(xì)胞

商品屬性

商品介紹

細(xì)胞別稱： BJ

種屬來(lái)源： 人

年齡性別： 暫無(wú)

組織來(lái)源： 皮膚

生長(zhǎng)特性： 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài)： 成纖維細(xì)胞樣，長(zhǎng)梭形，邊緣整齊，單層貼壁生長(zhǎng)，背景干凈，無(wú)空泡

背景簡(jiǎn)介：

生物安全等級(jí)： 1

細(xì)胞規(guī)格： 1×10^6cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)： 暫無(wú)

培養(yǎng)基： DMEM+10%FBS

培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

凍存條件： 液氮

傳代比例： 1:2

換液頻率： 2-3天換液一次

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

肌球蛋白輕鏈2(MYL2)重組蛋白 Recombinant Myosin Light Chain 2, Regulatory, Cardiac (MYL2)

HAO1 Protein Human 重組人 HAO1 / GOX1 蛋白

IFNA4重組小鼠 IFNA4 / IFNα4 / Interferon alpha-4 蛋白 Protein

NOV Protein Canine 重組狗 CCN3 / NOV 蛋白

APP重組人 Beta-amyloid 39 / Beta-APP39 蛋白 (aa 672-710, His & GST 標(biāo)簽) Protein

IFNA4重組小鼠 IFNA4 / IFNα4 / Interferon alpha-4 蛋白 Protein

肌球蛋白輕鏈2(MYL2)重組蛋白 Recombinant Myosin Light Chain 2, Regulatory, Cardiac (MYL2)

APP重組人 Beta-amyloid 39 / Beta-APP39 蛋白 (aa 672-710, His & GST 標(biāo)簽) Protein

HAO1 Protein Human 重組人 HAO1 / GOX1 蛋白

NOV Protein Canine 重組狗 CCN3 / NOV 蛋白

小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat aquaporin 5 (AQP-5) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白5(AQP-5)檢測(cè)試劑盒

Humanplacealribonucleaseinhibitor,HPRIELISAKit 人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanCiliaryNeuroophicFactor,CF檢測(cè)試劑盒人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組(leucine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

humanS100calciumbindingproteinA8/calgranulinA,S100A8ELISAKit人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

BJ人皮膚成纖維細(xì)胞兔血管細(xì)胞粘附分子-1(rabbit VCAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(rabbit VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔血管性血友病因子(rabbit VWF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔軟骨糖蛋白39(rabbit YKL-40)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

大鼠轉(zhuǎn)膠蛋白(TAGLN)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： TAGLN ELISA Kit

Mouse ai smooth muscle aibody (ASMA) ELISA Kit 小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)檢測(cè)試劑盒

Mousealkalinephosphatase,ALPELISAKit 小鼠堿性0酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanLeishimariaaibodyELISAKit人利什曼原蟲(chóng)抗體

脘蛋白基因變異分析試劑盒20次

ELISAKitEMAIgA大鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA